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| 產地 | 國產 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZ-75244 |
| 用途 | |
| 包裝規格 | 20T |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 否 |
上海滬崢專業生產銷售雞傳染性支氣管炎一步法RT-PCR診斷試劑盒現貨，我公司供應的分子生物學試劑品類齊全，且具有優勢價格，歡迎新老客戶咨詢認購。
產品詳細信息
名稱：雞傳染性支氣管炎一步法RT-PCR診斷試劑盒
規格： 20T/50T
品牌：上海滬崢
用途】 用于雞傳染性支氣管炎病毒病的檢測、診斷和行病學調查。
【操作步驟】1.RNA提取
(1) 取疑似雞傳染性支氣管炎病的病料（*、肺或尿液）1~4g于無菌研缽，研磨并用Hanks液或PBS稀釋成1：4劑，分裝1.5 mL滅菌EP管，反復凍融2~3次，8000r/min,心5分鐘。
（2）取200uL上清液（或標準品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。
（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，10000r/min離心5 min。
（4）將上清轉移到新的2 ml離心管（試劑盒內提供）中，加入300 uL 異丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均勻。
（5）將步驟4中的混合液移入制備管中，并將制備管置于同一2 ml離心管，10000 r/min離心1min。
（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，10000 r/min離心1 min。
（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min離心1 min。
（8）將制備管置回到2 ml離心管中，10000 r/min離心1 min。
（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-70℃凍存備用。
3 .PCR操作
4.電泳
配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產物5uL混合1uL TU-8，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3uLTU-7，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結果。
M 1
【結果判定】
在約440bp位置出現擴增帶，實驗結果為陽性
雞傳染性支氣管炎一步法RT-PCR診斷試劑盒
【注意事項】
1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫擱置太久。
3. 盡量建立PCR試驗操作區，避免交叉污染。
4. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結果情況，不予負責。
5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內壁，可用鑷子夾取。
6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。
傳統PCR對基因的檢測只能定性，不能定量主要是由擴增產物積累的動力學所決定的：①PCR產物在擴增過程中呈指數積累，當產物增加到一定程度，產物就停止了指數積累。不同起始模板，其指數增長期所用的循環是不同的，因此，不同數量基因的樣品在同一循環次數中積累的產物不能作為樣品基因定量的依據；②PCR產物積累到一定程度就不能再增加，再進入平臺期。為了擴大PCR檢出的靈敏度通常要增加循環次數，循環次數增加使得樣品目的基因含量高的反應管已進入平臺期，終產物量并不代表樣品目的基因含量；③PCR反應的管間擴增效率差異總是存在的，既然PCR產物呈指數增長，由擴增效率差異引起的產物擴增差異也呈指數積累，增加循環次數勢必增加終產物的差異，而減少循環次數又降低了檢測的靈敏度。FQ-PCR采用實時檢測，使所有含有不同數量的目的基因均在同一條件（達到熒光閾值）下進行分析，因而更具有可比性。而且，這一條件處于擴增產物指數積累初期，合成產物所需的dNTP、酶、離子均處于飽和的*狀態，所以FQ-PCR循環參數與起始模板間有良好的線性關系（相關系數＞0.95），實現了極為精確的基因定量檢測。
