|





| 產地 | 國產 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZ-75230 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規格 | 20T/50T |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
上海滬崢專業生產銷售豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒現貨,我公司供應的分子生物學試劑品類齊全,且具有優勢價格,歡迎新老客戶咨詢認購。
產品詳細信息
名稱:豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒現貨
規格: 20T/50T
品牌:上海滬崢
【用途】用于豬傳染性胃腸炎病毒病的檢測、診斷和流行病學調查。
【操作步驟】
1.RNA提取
(1)取疑似豬傳染性胃腸炎病毒病的病料(空腸、小腸及其內容物等),用Hank’s液或PBS研磨成1:3懸液,在-20 ℃反復凍融3次,經3 000 r/min離心5 分鐘,上清液再經12 000 r/min離心15分鐘,上清液-70 ℃保存備用。
(2)取200uL上清液(或標準品T),移入新的1.5mL滅菌EP管中,加入400uLSR-I,反復顛倒幾次混勻,室溫放置5~10分鐘。
(3)加入200uL氯仿,漩渦振蕩15秒混勻。室溫下放置2~3分鐘。
(4)12000r/min離心10分鐘,取上層水相(注意:切勿吸取到里兩相之間的雜質),轉移到一個新的EP管中,再加入等體積異丙醇混勻,室溫放置10分鐘。
(5)12000r/min離心10分鐘,棄去上清,加入SR-II 700uL,充分洗滌沉淀RNA后,12000r/min離心5分鐘,小心吸去上清(注意:嚴格防止RNA丟失)。
(6)用潔凈吸水紙吸干管壁的SR-II,室溫放置2~3分鐘。用20uLTU-5溶解,即為模板,即用或-70℃凍存備用。
72℃延伸
3.PCR操作
4.電泳
稱量0.25g瓊脂糖,放入錐形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×濃縮液,儲存備用),于微波爐中熔解,加入1.5μl的TU-9混勻。封閉好電泳槽,加入梳子,倒入瓊脂凝膠,待凝固后,將PCR產物6μl混合1.5μl TU-7,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加入3μlTU-8,在100v 電壓下,1×TAE液中電泳30分鐘,在紫外成像儀下觀察結果。

【結果判定】
在342bp(豬放線桿菌胸膜肺炎)及841bp(副豬嗜血桿菌)位置出現擴增帶,實驗結果為陽性
豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒
【注意事項】
1. 每次使用,開蓋之前請先瞬時離心,使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存,-20℃保存試劑盡量減少反復凍融,使用后的試劑立即放回,避免在室溫擱置太久。
3. 盡量建立PCR試驗操作區,避免交叉污染。
4. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行,由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結果情況,不予負責。
5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前,要高壓滅菌,操作過程盡量不要用手接觸到管內壁,可用鑷子夾取。
6. 注意防止試劑污染,在有效期限前用完。